Методы лабораторной диагностики

в этой статье описано что такое метод ПЦР, применительно к исследованиям для человека;
прочитайте, чтобы понять суть;

в конце статьи дана ссылка на статью о ПЦР-диагностике вирусных и бактериальных инфекций домашних животных


ДНК-диагностика: ПЦР-анализ

ДНК-диагностика — это один из наиболее современных высокотехнологичных методов исследования.

ДНК-анализы широко применяются в диагностике инфекционных заболеваний , позволяя обнаруживать даже единичные микроорганизмы в организме.

ДНК-диагностика объединяет несколько методов исследования, самый распространенный из них — метод ПЦР (полимеразной цепной реакции).

ПЦР диагностикаЧто такое ПЦР

ПЦР — (Polymerase chain reaction, PCR diagnostics) - расшифровывается как полимеразная цепная реакция.
ПЦР диагностика — это метод лабораторной диагностики инфекционных заболеваний, в частности, этот метод широко применяется и для диагностики ЗППП — заболеваний, передающихся половым путем.

Анализ методом ПЦР основан на обнаружении в материале исследования небольшого фрагмента ДНК возбудителя той инфекции, которую подозревает врач. «Небольшой фрагмент ДНК» — это несколько сотен пар оснований ДНК — кирпичиков, расположенных в строго определенной последовательности, и потому образующих неповторимый узор. Для ПЦР-диагностики инфекций достаточно небольшого фрагмента, поскольку любая ДНК включает в себя не менее нескольких тысяч оснований.
При проведении ПЦР-анализа ведется поиск такого фрагмента ДНК инфекции, который специфичен только для данного микроорганизма. Это значит, что этот фрагмент ДНК «особенный» — он встречается только у этого микроба (или группы родственных микробов), но не встречается ни у одного другого микроба.
Сама полимеразная цепная реакция (пцр диагностика) используется для того, чтобы найденный фрагмент размножить, клонировать: чтобы однозначно «увидеть» эти фрагменты ДНК, к окончанию реакции их должно быть не мене 1012 штук.


История открытия ДНК и разработки метода ПЦР

Первоначально сам принцип метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) был разработан Кэри Мюллисом в 1983г. Открытие ПЦР стало одним из наиболее выдающихся событий в области молекулярной биологии за последние 20 лет, и за разработку ПЦР-анализа Кэрри Мюллис уже в 1993 г. был удостоен Нобелевской премии в области химии.
Появлению метода проведения полимеразной цепной реакции предшествовали определенные достижения молекулярной генетики: к тому времени уже были расшифрованы нуклеотидной последовательности геномов ряда микроорганизмов и выделены специфические.
Также появлению ПЦР много способствовало открытие уникального фермента ДНК-полимеразы (или taq-полимеразы). Именно этот фермент катализирует и «контролирует» все процессы во время проведения анализа методом ПЦР.
Особенность этого фермента — он термостабилен, исключительно термостоек: он выдерживает нагревание до температуры кипения без потери активности, а «любимый» его температурный режим во время работы — 72оС. Многие реакции при проведении ПЦР идут почти исключительно при повышенной температуре.
С момента появления метода, ПЦР-исследования завоевывают все большую и большую популярность. Врачи , лаборанты и микробиологи, без преувеличения, просто в восторге от этого метода . По словам врачей и лаборантов, ПЦР-анализ прост в исполнении, обладает непревзойденными показателями чувствительности и специфичности. Все эти показатели способствовали тому, что диагностика методом ПЦР стремительно распространилась по всему миру.
В настоящее время метод ПЦР-диагностики развивается семимильными шагами. Во всем мире совершенствуются, модифицируются и разрабатываются всевозможные модификации ПЦР-анализа. Каждый год на медицинский рынок поступает десятки новых разработок и тест-систем ПЦР-диагностики, предназначенных для выявления нуклеотидных последовательностей различных микроорганизмов — возбудителей инфекционных заболеваний. Новые разработки для проведения ДНК-исследований с каждым разом снижают себестоимость ПЦР-анализа, делая его доступным для широкого использования в диагностических и лечебных целях.
Материал для сдачи ПЦР-анализа

Материалом для проведения ПЦР-диагностики может служить:

• соскоб эпителиальных клеток (соскоб из уретры у мужчин и у женщин, соскоб из цервикального канала)
• кровь, плазма, сыворотка крови
• биологические жидкости (сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкости, слюна)
• моча (используется первая порция утренней мочи)
• мокрота
• биопаты желудка и двенадцатиперстной кишки
• слизь и другие биологические выделения
Срок изготовления
Результат ПЦР-диагностики обычно можно получить через 1,5—2 суток после сдачи анализа. Возможно получение результатов ПЦР-теста в течение одного дня.

ссылка на статью о ПЦР-диагностике вирусных и бактериальных инфекций домашних животных

http://www.veterinarka.ru/content/view/1751/72/